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産業動物防疫リサーチセンター |
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論文 【 表示 ／ 非表示 】
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Direct TaqMan assay for the detection and genotyping of bovine viral diarrhea virus types 1 and 2 査読あり 国際共著 国際誌
Shakir Ullah, Kosuke Notsu, Akatsuki Saito, Tamaki Okabayashi, Hirohisa Mekata, Norikazu Isoda, Satoshi Sekiguchi
Archives of Virology 170 ( 1 ) 1 - 10 2025年1月
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：Springer Science and Business Media LLC
Abstract
Bovine viral diarrhea (BVD), caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV), has a significant economic impact on affected farms worldwide. For effective disease control, it is crucial to select an appropriate vaccine based on the specific genotype of BVDV. Therefore, developing a rapid and reliable assay to detect and genotype BVDV is imperative for controlling the spread of disease. In this study, we developed a TaqMan assay to detect and genotype BVDV types 1 and 2 directly in bovine serum without extraction of RNA. The direct BVDV TaqMan assay effectively detected both BVDV1 and BVDV2 with confirmed specificity and showed no cross-reactivity with any of the other viruses tested, including bovine respiratory syncytial virus, bovine coronavirus, Akabane virus, bovine herpesvirus 1, bovine parainfluenza virus 3, bovine immunodeficiency virus, and bovine leukemia virus. The assay could detect the virus in serum samples with a titer as low as 10<sup>2</sup> TCID<sub>50</sub>/mL in two out of three trials for BVDV1 and all three trials for BVDV2, indicating that its sensitivity is equivalent to that of virus isolation. Our findings represent a significant advancement in BVDV detection and typing directly from bovine serum.DOI： 10.1007/s00705-024-06207-z
その他リンク： https://link.springer.com/article/10.1007/s00705-024-06207-z/fulltext.html
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Complete genome sequence of the avian paramyxovirus serotype 9 strain duck/Miyazaki/128/2021. 査読あり 国際共著 国際誌
Hirohisa Mekata, Mari Yamamoto, Yuto Matsui, Ahmad Massoud Niazi, Kentaro Yamada, Tamaki Okabayashi, Se-Yeoun Cha, Hyung-Kwan Jang
Microbiology resource announcements 13 ( 11 ) e0006024 2024年11月
担当区分：筆頭著者, 責任著者 記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌）
Here, we report the complete genome sequence of the avian paramyxovirus serotype 9 strain duck/Miyazaki/128/2021, which was determined using the Illumina MiSeq platform. The position of the hemagglutinin-neuraminidase stop codon differed from that of the only other available completely sequenced prototype strain, duck/New York/22/1977.
DOI： 10.1128/mra.00060-24
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Nine-year seroepidemiological study of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus infection in feral horses in Cape Toi, Japan. 査読あり 国際誌
Hirohisa Mekata, Kentaro Yamada, Kazumi Umeki, Mari Yamamoto, Akihiro Ochi, Kunihiko Umekita, Ikuo Kobayashi, Takuya Hirai, Tamaki Okabayashi
BMC veterinary research 20 ( 1 ) 190 - 190 2024年5月
担当区分：筆頭著者, 責任著者 記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌）
Severe fever with thrombocytopenia syndrome (SFTS) is a fatal zoonosis caused by ticks in East Asia. As SFTS virus (SFTSV) is maintained between wildlife and ticks, seroepidemiological studies in wildlife are important to understand the behavior of SFTSV in the environment. Miyazaki Prefecture, Japan, is an SFTS-endemic area, and approximately 100 feral horses, called Misaki horses (Equus caballus), inhabit Cape Toi in Miyazaki Prefecture. While these animals are managed in a wild-like manner, their ages are ascertainable due to individual identification. In the present study, we conducted a seroepidemiological survey of SFTSV in Misaki horses between 2015 and 2023. This study aimed to understand SFTSV infection in horses and its transmission to wildlife. A total of 707 samples from 180 feral horses were used to determine the seroprevalence of SFTSV using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Neutralization testing was performed on 118 samples. In addition, SFTS viral RNA was detected in ticks from Cape Toi and feral horses. The overall seroprevalence between 2015 and 2023 was 78.5% (555/707). The lowest seroprevalence was 55% (44/80) in 2016 and the highest was 92% (76/83) in 2018. Seroprevalence was significantly affected by age, with 11% (8/71) in those less than one year of age and 96.7% (435/450) in those four years of age and older (p < 0.0001). The concordance between ELISA and neutralization test results was 88.9% (105/118). SFTS viral RNA was not detected in ticks (n = 516) or feral horses. This study demonstrated that horses can be infected with SFTSV and that age is a significant factor in seroprevalence in wildlife. This study provides insights into SFTSV infection not only in horses but also in wildlife in SFTS-endemic areas.
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MALDI-TOF MS analysis for detection of bovine coronavirus with tryptic peptides from viral proteins. 査読あり 国際誌
Katsuhiko Hayashi, Kenji Ohya, Tomoya Yoshinari, Shouhei Hirose, Souta Shimizu, Yuji Morita, Takahiro Ohnishi, Maiko Watanabe, Satoshi Taharaguchi, Hirohisa Mekata, Takahide Taniguchi, Yukiko Hara-Kudo
Journal of microorganism control 29 ( 4 ) 143 - 151 2024年
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌）
Bovine coronavirus (BCoV）, a significant cattle pathogen causing enteric and respiratory diseases, is primarily detected using reverse transcription-polymerase chain reaction. Our objective was to develop a novel detection method for BCoV by matrix-assisted laser desorption/ionization‒time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS）. Peptide mass fingerprint analysis revealed that nucleocapsid (N）, membrane (M）, and hemagglutinin-esterase (HE) were three main BCoV proteins. Their tryptic peptides were used as target molecules for BCoV detection. When the tryptic digest of 107.0 viral copies was analyzed by MALDI-TOF MS, five peptides with relatively strong peaks were detected. The detection limit was between 105.0 and 106.0 copies per test for BCoV alone. To detect BCoV in the swab eluate, ultrafiltration purification achieved a detection limit between 106.0 and 107.0 copies per test, sufficient to detect BCoV-infected calves. Our findings offer valuable insights for BCoV detection by MALDI-TOF MS.
DOI： 10.4265/jmc.29.4_143
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Yuri L Tanaka, Maya Shofa, Erika P Butlertanaka, Ahmad Massoud Niazi, Takuya Hirai, Hirohisa Mekata, Akatsuki Saito
Pathogens 13 ( 1 ) 18 - 18 2023年12月
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：MDPI AG
Pigs are important animals for meat production but can carry several zoonotic diseases, including the Japanese encephalitis virus, Nipah virus, and influenza viruses. Several Orthomyxoviridae and Coronavirinae respiratory viruses require cleavage of envelope proteins to acquire viral infectivity and consequently, need a host protease or the addition of exogenous trypsin for efficient propagation. Host TMPRSS2 is a key protease responsible for viral cleavage. Stable expression of human TMPRSS2 in African green monkey-derived Vero cells can enhance the porcine epidemic diarrhea virus. However, considering the narrow host tropism of viruses, a porcine cell line expressing pig TMPRSS2 could be optimal for replicating pig-derived viruses. Herein, we generated and evaluated a pig-derived PK-15 cell line stably expressing pig TMPRSS2. This cell line markedly (>1000-fold) and specifically enhanced the growth of influenza viruses. Furthermore, we demonstrated the usefulness of a PK-15 cell line lacking the Stat2 gene with a stable expression of pig TMPRSS2 for efficient virus isolation from clinical samples in the presence of type I interferons. Therefore, PK-15 cells expressing pig TMPRSS2 could be a valuable and promising tool for virus isolation, vaccine production, and virological studies of TMPRSS2-dependent viruses.
書籍等出版物 【 表示 ／ 非表示 】
MISC 【 表示 ／ 非表示 】
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MALDI-ToF MSによる鼻咽頭拭い液中のSARS-CoV-2の直接検出法の開発
林克彦, 吉成知也, 廣瀬昌平, 大屋賢司, 大西貴弘, 渡辺麻衣子, 田原口智士, 目堅博久, 谷口隆秀, 前田卓哉, 折原悠太, 川村利江子, 新井沙倉, 斎藤嘉朗, 合田幸広, 工藤由起子
日本薬学会年会要旨集(Web) 143rd 2023年
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牛伝染性リンパ腫の診断と早期発症予測法の開発
富永みその, 今内覚, 岡川朋弘, 神谷可菜, 齋藤麻矢, 安富一郎, 目堅博久, 前川直也, 村田史郎, 大橋和彦
北海道獣医師会雑誌 67 ( 8 ) 2023年
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MALDI-ToF/MSによるSARS-CoV-2の新規検出法の開発
廣瀬昌平, 吉成知也, 林克彦, 大屋賢司, 大西貴弘, 渡辺麻衣子, 田原口智士, 目堅博久, 谷口隆秀, 新井沙倉, 合田幸広, 工藤由起子
日本獣医学会学術集会講演要旨集 165th (CD-ROM) 2022年
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次世代シーケンス(NGS)を用いた豚糞便中のウイルス検索:新しいBastrovirus遺伝子の発見
長井誠, 岡林環樹, 松鵜彩, 藤本佳万, 目堅博久, 中尾亮, 浅井鉄夫, 中川敬介, 伊藤壽啓, 野中成晃, 小原恭子, 猪島康雄, 水谷哲也, 三澤尚明
日本獣医学会学術集会講演要旨集 163rd 2020年
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プロウイルス量に基づいた牛白血病対策ノススメ
目堅博久
家畜感染症学会誌 7 ( 4 ) 163 - 168 2018年12月
記述言語：日本語 掲載種別：記事・総説・解説・論説等（大学・研究所紀要）
講演・口頭発表等 【 表示 ／ 非表示 】
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伴侶動物と野生動物のSFTS
目堅博久
第2回RCGLID&CADIC共同セミナー (大分大学) 2024年12月2日 大分大学グローカル感染症研究センター（RCGLID）
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牛伝染性リンパ腫対策について 招待あり
目堅博久
家畜防疫・衛生指導対策事業に関わる地域自衛防疫取組推進会議 (津市) 2024年9月26日 三重県畜産協会
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2021-23年度に宮崎⼤学で実施した伴侶動物の SFTS 検査
目堅博久, 金子泰之, 平井卓哉, 梅木一美, 梅北邦彦, 山田健太郎, 岡林環樹
第6回SFTS研究会 (札幌市) 2024年9月14日 SFTS研究会
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Urine from cats with severe fever with thrombocytopenia syndrome could be an infectious source 国際会議
Hirohisa Mekata, Yasuyuki Kaneko, Kentaro Yamada, Tamaki Okabayashi, Akatsuki Saito
The 4th Joint Meeting of Veterinary Science in East Asia (Obihiro) 2024年9月8日 The Japanese Society of Veterinary Science
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プロウイルス量を使った繁殖農場でのBLV対策と課題 招待あり
目堅博久
第64回獣医疫学会学術集会(シンポジウム) (オンライン) 2024年8月31日 獣医疫学会
受賞 【 表示 ／ 非表示 】
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日本獣医学会獣医学奨励賞
2013年3月 日本獣医学会
目堅 博久
受賞区分：国内学会・会議・シンポジウム等の賞 受賞国：日本国
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第１５５回日本獣医学会大会長賞
2013年3月 日本獣医学会
目堅 博久
受賞区分：国内学会・会議・シンポジウム等の賞 受賞国：日本国
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日本産業動物獣医学会九州地区学会長賞
2014年10月 日本産業動物獣医学会
目堅 博久
受賞区分：国内学会・会議・シンポジウム等の賞 受賞国：日本国
科研費（文科省・学振・厚労省）獲得実績 【 表示 ／ 非表示 】
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動物フォーミーウイルスベクターの基盤構築と牛伝染性リンパ腫ワクチンの開発
研究課題/領域番号：23K23765 2024年04月 - 2026年03月
独立行政法人日本学術振興会 科学研究費基金 基盤研究(B)
担当区分：研究代表者
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ベトナムにおけるアフリカ豚熱の実践的な高感度診断法の開発と環境動態の解明
研究課題/領域番号：22KK0097 2022年04月 - 2027年03月
独立行政法人日本学術振興会 科学研究費基金 国際共同研究加速基金(国際共同研究強化(B))
担当区分：研究分担者
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動物フォーミーウイルスベクターの基盤構築と牛伝染性リンパ腫ワクチンの開発
研究課題/領域番号：22H02500 2022年04月 - 2026年03月
日本学術振興会 科学研究費補助金 基盤研究(B)
目堅 博久
担当区分：研究代表者
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共生レトロウイルスの抗腫瘍ポテンシャルの解明と有効活用
研究課題/領域番号：20H03150 2020年04月 - 2024年03月
独立行政法人日本学術振興会 科学研究費補助金 基盤研究(B)
宮沢 孝幸, 中川 草, 目堅 博久
担当区分：研究分担者
ほぼすべてのレトロウイルスは宿主に様々な重篤な疾病を引き起こし、獣医臨床上大きな問題となっている。ところが、レトロウイルスの一種であるフォー ミーウイルスは、宿主に終生持続感染するものの、いかなる疾病を引き起こさない。最近我々はニホンザル由来のフォーミーウイルスが、がんを抑制するマイク ロRNA（miRNA）を感染細胞で大量に産生することを見出した。本研究は、フォーミーウイルス由来miRNAの抗腫瘍ポテンシャルに着目し、このウイルスがいかにして宿主にがんを引き起こすことなく宿主と共存しているのかを明らかにする。また、フォーミーウイルスが宿主のmiRNA産生系を乗っ取り、大量のmiRNAを産生す るメカニズムを明らかにする。そしてこれらの知見を利用して、腫瘍抑制性miRNAを強力に発現しうる新規ウイルスベクターを開発し、家畜や伴侶動物を対象とした新規がん治療法へ道を拓く。
これまでに、様々な霊長類（ニホンザル、タイワンザル、アカゲザルなど）からSFVを、ネコ科動物（イエネコ、イリオモテヤマネコ、ベンガルヤマネコなど） からFFVを分離している。今回、イエネコ由来FFVの塩基配列（特にmiRNAを産生することが 予想されるLTR配列）を決定し、in silico解析により産生されるmiRNAを予測した。 FFVをネコ由来株化細胞（CRFK細胞）に感染させ、CRFK持続感染細胞を得た。さらに非感染細胞及び持続感染細胞からmRNAならびに短鎖RNAを抽出し、網羅的な転写産物解析（トランスクリプトーム解析）を行った。そして、短鎖RNAの配列をフォーミーウイルスの塩基配列にマップし、FFV由来のmiRNAを特定した。また同定したmRNA配列の解析により、ウイルス由来miRNAの標的となる宿主mRNAを推測した。 -
経済的被害をもたらす子豚の呼吸器病ウイルスによる鼻咽腔および肺の病態解析
研究課題/領域番号：18K05974 2018年04月 - 2021年03月
日本学術振興会 科学研究費助成事業 基盤研究(C)
平井 卓哉, 目堅 博久
担当区分：研究分担者
宮崎県の養豚場において、子豚から豚インフルエンザウイルス（A/H1N1pdm09）が検出された。これらの豚は呼吸器症状を示さず、不顕性感染と考えられた。鼻咽腔関連リンパ組織（NALT）を覆う上皮はCK-18抗体に陽性を示し、M細胞の存在が示唆された。また、インフルエンザウイルスの受容体であるα(2-6)型シアル酸が、α(2-3)型より多いことが明らかになった。一部の上皮細胞はCK-18とα(2-6)型シアル酸と両方に陽性を示すため、M細胞はα(2-6)型シアル酸を有することが示唆された。NALT内のマクロファージはインフルエンザ抗原陽性を示し、M細胞を介して取り込まれた可能性が考えられた。
その他競争的資金獲得実績 【 表示 ／ 非表示 】
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医獣連携による重症熱性血小板減少症候群の病態機序の解明
研究課題/領域番号：22682778 2022年07月 - 2023年03月
国立研究開発法人日本医療研究開発機構 日本医療研究開発機構研究費 新興・再興感染症に対する革新的医薬品等開発推進研究事業
目堅博久
担当区分：研究分担者
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網羅的ジェノタイピングによる新規牛白血病抵抗性遺伝子の同定
2019年04月 - 2022年03月
伊藤記念財団 伊藤記念財団研究助成
担当区分：研究代表者 資金種別：競争的資金
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牛白血病ウイルス高感染牛の予後の評価
2015年04月 - 2016年03月
伊藤記念財団 伊藤記念財団研究助成
資金種別：競争的資金
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牛白血病ウイルスの垂直伝播に関する研究
2014年04月 - 2015年03月
伊藤記念財団 伊藤記念財団研究助成
担当区分：研究代表者 資金種別：競争的資金
牛白血病ウイルスの垂直伝播に関する研究
受託研究受入実績 【 表示 ／ 非表示 】
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次亜塩素酸ナトリウム（製品名：SteriNa)によるSARS-CoV-2不活化試験
2020年12月 - 2021年06月
SSP株式会社 一般受託研究
担当区分：研究分担者 受託研究区分：一般受託研究
共同研究実施実績 【 表示 ／ 非表示 】
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渡り鳥飛来湖沼水を用いた鳥インフルエンザウイルス検出手法の確立とその実用化に係る研究
2024年06月 - 2025年05月
株式会社AdvanSentinel 国内共同研究
山田 健太郎、目堅 博久
担当区分：研究分担者 共同研究区分：国内共同研究
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離島における牛伝染性リンパ腫対策法の確立
2023年08月 - 2025年03月
喜界町農業振興課 国内共同研究
担当区分：研究代表者 共同研究区分：国内共同研究