論文 - 西木 一生
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Araki Kaho, Nishiki Issei, Yoshida Terutoyo
魚病研究 59 ( 4 ) 119 - 126 2024年12月
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：日本魚病学会
<i>Lactococcus garvieae</i> serotype III, a newly emerging pathogen that causes lactococcal infection, has been detected in fish farms since 2021. This pathogen has caused severe damage to the striped jack <i>Pseudocaranx dentex</i> and greater amberjack <i>Seriola dumerili</i>. This study collected strains from various fish species on farms between 2021 and 2023 and conducted an epidemiological and characterization study of <i>L. garvieae</i> serotype III using biochemical characterization tests, agglutinating titers against diagnostic antisera, biased sinusoidal field gel electrophoresis (BSFGE), and drug susceptibility tests. Capsule-like structures were found on the cell surfaces of <i>L. garvieae</i> serotype III strains, and strains showed similar characteristics except for the reaction of acidification ribose in biochemical characterization test using the API 20 STREP system. All strains were agglutinated with antiserum raised against <i>L. garvieae</i> serotype III and lower or non-agglutinated with antiserum raised against <i>L. garvieae</i> serotype I. BSFGE analysis identified three types of electrophoretic pattern: A, B, and C. BSFGE types A and B spread to fish farms in 2021, while type C found in 2022. All strains analyzed in this study were thought to be resistant to lincomycin but not to erythromycin.
DOI： 10.3147/jsfp.59.119
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日本の海産魚類養殖で発生している<i>Lactococcus</i>感染症原因細菌の判別法の開発
荒木 香帆, 毛利 文香, 南 隆之, 西木 一生, 吉田 照豊
魚病研究 59 ( 2 ) 63 - 70 2024年6月
記述言語：日本語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：日本魚病学会
日本の海産魚類養殖における<i>Lactococcus</i>感染症の原因細菌は血清型および遺伝学的解析により<i>Lactococcus garvieae</i> Ⅰ型，<i>L. formosensis</i> (従来の<i>L. garvieae</i> Ⅱ型) および<i>L. garvieae</i> Ⅲ型に分類される。各型の判別法として用いられる抗血清によるスライド凝集試験では，複数の抗血清に凝集を示す株の型判別が困難であり，従来のPCRでは，Ⅰ型レンサ球菌とⅢ型レンサ球菌を判別できなかった。本研究では，各型に特異的な遺伝子配列からプライマーを設計し，マルチプレックスPCRによる判別法の開発を試みた。マルチプレックスPCRを実施した結果，各型から予想サイズの増副産物が確認され，海産魚類以外を由来とする<i>Lactococcus</i>属細菌からは増副産物は得られなかった。本マルチプレックスPCRは，日本で発生しているレンサ球菌の各型の判別法として有効であることが示された。
DOI： 10.3147/jsfp.59.63
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ブリおよびシマアジに対する<i>Lactococcus garvieae</i>血清型Ⅲ型の病原性
岩尾 豊, 南 隆之, 吉田 照豊, 西木 一生
魚病研究 59 ( 1 ) 33 - 35 2024年3月
記述言語：日本語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：日本魚病学会
<i>L. garvieae</i>血清型Ⅲ型（以下「LGⅢ型」という）のカンパチに対する病原性は明らかになったが，ブリおよびシマアジに対する病原性は明らかにされていない。このため，LGⅢ型カンパチおよびブリ由来株を用いて，ブリまたはシマアジに対する病原性を評価した。また，ブリについては菌株の由来および給餌条件を変えて検討した。その結果，シマアジに対するLD<sub>50</sub> は 2.2×10<sup>3</sup> CFU/fish未満であった。ブリに対するLD<sub>50</sub> は，カンパチ由来株を用いて攻撃後絶食条件下で飼育した場合では 2.1×10<sup>7</sup> CFU/fish以上であり，ブリ由来株を用いて攻撃後5日間飽食給餌で飼育した場合では 2.3×10<sup>6.3</sup> CFU/fishであった。LGⅢ型はシマアジに対し強い病原性を示した。また絶食条件下での病原性評価試験ではブリに対するLD<sub>50</sub> が高かったことから，投薬前の絶食処理が治療効果を上げる可能性が示された。
DOI： 10.3147/jsfp.59.33
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日本の海産養殖魚で発生した新血清型<i>Lactococcus garvieae</i>感染症 査読あり
南 隆之, 吉田 照豊, 西木 一生
魚病研究 58 ( 4 ) 146 - 152 2023年12月
担当区分：責任著者 記述言語：日本語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：日本魚病学会
<i>Lactococcus garvieae</i>Ⅰ型およびⅡ型を含む市販の混合ワクチンを投与した宮崎県の養殖カンパチで，2021年8月から<i>L. garvieae</i>感染症に類似した症状を呈する疾病が確認されるようになった。分離された菌株は，<i>L. garvieae</i>診断用抗Ⅰ型およびⅡ型血清に対して非凝集性を示し，多遺伝子座配列解析（MLSA）において<i>L. garvieae</i>Ⅰ型に近く，Ⅱ型とは遺伝学的相違性が認められた。同菌株を用いたカンパチに対する腹腔内接種による感染試験では，半数致死濃度は 1.6×10<sup>3</sup> CFU/FISH未満であった。また，Ⅰ型およびⅡ型の混合ワクチンを接種したカンパチにおいて，今回分離した菌株に対する感染防御効果は認められなかった。一方，今回分離した菌株のホルマリン不活化ワクチンは，同菌株の感染に対して高い防御効果が確認された。以上の結果から，今回分離された従来のⅠ型およびⅡ型診断用抗血清に凝集せず，Ⅰ型およびⅡ型ワクチンの効果がない菌株を<i>L. garvieae</i>Ⅲ型と呼称することを提案する。
DOI： 10.3147/jsfp.58.146
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Muhammad Akmal, Kaho Araki, Issei Nishiki, Terutoyo Yoshida
PHAGE 4 ( 4 ) 151 - 158 2023年12月
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Akmal M, Akatsuka M, Nishiki I, Yoshida T
Journal of fish diseases 46 ( 8 ) 841 - 848 2023年8月
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：Wiley
<jats:title>Abstract</jats:title><jats:p>The emergence of antibiotic‐resistant pathogenic strains of <jats:italic>Lactococcus garvieae</jats:italic> serotype II isolated from fish in Japan has become a growing concern in recent years. The data on drug susceptibility and its associated resistance mechanism are limited. Therefore, the present study was conducted to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) of chemotherapeutic agents against 98 pathogenic strains of emerging <jats:italic>Lactococcus garvieae</jats:italic> serotype II isolated from fish from six different prefectures in Japan from 2018 to 2021. The tested strains were resistant to erythromycin, lincomycin and tiamulin. PCR amplification revealed the presence of <jats:italic>erm</jats:italic>(B) in all erythromycin‐resistant strains, while a conjugation experiment confirmed that these strains carried <jats:italic>erm</jats:italic>(B) that could be transferred to recipient <jats:italic>Enterococcus faecalis</jats:italic> OG1RF with frequencies from 10<jats:sup>−4</jats:sup> to 10<jats:sup>−6</jats:sup> per donor cells. Nucleotide sequencing of the representative isolated plasmid pkh2101 from an erythromycin‐resistant strain showed that it was a 26,850 bp molecule with an average GC content of 33.49%, comprising 31 CDSs, 13 of which remained without any functional annotation. Comparative genomic analysis suggested that pkh2101 shared the highest similarity (97.57% identity) with the plasmid pAMbeta1, which was previously isolated clinically from <jats:italic>Enterococcus faecalis</jats:italic> DS‐5. This study provides potential evidence that the plasmid harbouring <jats:italic>erm</jats:italic>(B) could be a source of antibiotic resistance transmission in emerging <jats:italic>L. garvieae</jats:italic> infection in aquaculture.</jats:p>
DOI： 10.1111/jfd.13793
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Shi Yin-Ze, Nishiki Issei, Yoshida Terutoyo
魚病研究 58 ( 2 ) 48 - 59 2023年6月
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：日本魚病学会
This study aimed to elucidate the genetic characteristics of lincomycin (LCM) resistance in the absence of erythromycin (EM) resistance in fish pathogenic <i>Lactococcus</i> <i>garvieae</i> serotype I. Two novel <i>lsa</i>(D) variants were found in clinically LCM-sensitive and resistant strains. The amino acid sequences of the two Lsa(D) variants shared 94.77% identity with that of Lsa(D) in <i>L</i>. <i>garvieae</i> serotype II. One of the <i>lsa</i>(D) variants, designated as <i>lsa</i>(D)<i><sup>36A</sup></i>, conferred cross-resistance to lincosamides, streptogramins A, and pleuromutilin, which was defined as the LS<sub>A</sub>P-resistant phenotype. This phenotype was confirmed by the minimum inhibitory concentrations of the <i>lsa</i>(D)<i><sup>36A</sup></i>-disruption mutant Δ<i>lsa</i>(D)<i><sup>36A</sup></i>, and its complementation strain. However, a single-point mutation, which led to an amino acid substitution, was found in <i>lsa</i>(D)<i><sup>36D</sup></i> in clinically LS<sub>A</sub>P-sensitive strains. In addition, single-nucleotide replacement of <i>lsa</i>(D)<i><sup>36D</sup></i> alleles was identified in laboratory-induced LCM-resistant mutants. Meanwhile, the <i>lsa</i>(D)<i><sup>36D</sup></i> or <i>lsa</i>(D)<i><sup>36A</sup></i> was also detected in EM-resistant strains carrying <i>erm</i>(B). These strains carried <i>lsa</i>(D)<i><sup>36D</sup></i> with <i>erm</i>(B) or <i>lsa</i>(D)<i><sup>36A</sup></i> with <i>erm</i>(B), which conferred the EM- and LCM-resistant (ML-resistant) or MLS<sub>A</sub>P-resistant phenotype, respectively. In conclusion, <i>lsa</i>(D)<i><sup>36D</sup></i> was an intrinsic in the LS<sub>A</sub>P-sensitive <i>L</i>. <i>garvieae</i> serotype I, and its mutated allelic variant was named as <i>lsa</i>(D)<i><sup>36A</sup></i>, which explains the characteristic resistance of this strain to the LS<sub>A</sub>P-resistance phenotype.
DOI： 10.3147/jsfp.58.48
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養殖カンパチで発生している<i>Vibrio anguillarum</i> J-O-1型感染症 査読あり
南 隆之, 俵 佑誠, 廣川 祐介, 西木 一生
魚病研究 57 ( 4 ) 131 - 135 2023年1月
担当区分：責任著者 記述言語：日本語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：日本魚病学会
市販のJ-O-3型ビブリオ病ワクチンを投与した養殖カンパチで眼球突出，眼球白濁，頭部上皮組織の剥離および鰓蓋発赤の症状を呈する疾病が発生した。死亡魚から分離した細菌はAPE20E，抗<i>Vibrio anguillarum</i> J-O-1 ウサギ血清への凝集反応，ビブリオ属細菌同定用マルチプレックスPCRおよび16S rRNA配列の解析から<i>V. anguillarum</i> J-O-1型に同定された。分離細菌は感染実験によりカンパチに病原性を示すことが確認された。また，分離細菌を用いて作製したホルマリン不活化ワクチンでカンパチを免疫して攻撃実験を行った結果，対照区と比べ免疫区は有意に死亡率が低かった。カンパチで確認された<i>V. anguillarum</i> J-O-1型感染症はホルマリン不活化菌体の免疫で予防できる可能性が示された。
DOI： 10.3147/jsfp.57.131
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Akmal M, Yoshida T, Nishiki I
Microbiology resource announcements 11 ( 12 ) e0089022 2022年12月
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：American Society for Microbiology
<jats:p>
Here, we report the complete genome sequence of a potentially new serotype,
<jats:named-content content-type="genus-species">Lactococcus garvieae</jats:named-content>
strain MS210922A, isolated from greater amberjack. It is nonreactive to serotype I or II antisera. The complete genome comprises 2,007,159 bp, including 1,929 coding, 16 rRNA, and 58 tRNA genes, with 38.9% G+C content.
</jats:p>DOI： 10.1128/mra.00890-22
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Complete genome sequence of a novel lytic bacteriophage, PLG-II, specific for Lactococcus garvieae serotype II strains that are pathogenic to fish. 査読あり
Akmal M, Nishiki I, Zrelovs N, Yoshida T
Archives of virology 167 ( 11 ) 2331 - 2335 2022年11月
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Shi YZ, Yoshida T, Fujiwara A, Nishiki I
Microbial drug resistance (Larchmont, N.Y.) 27 ( 3 ) 301 - 310 2021年3月
記述言語：英語 掲載種別：研究論文（学術雑誌） 出版者・発行元：Mary Ann Liebert Inc
Aims: Fish pathogenic Lactococcus garvieae serotype II has been isolated from cultured fish species in Japan. This study aimed to investigate the molecular mechanisms of lincomycin (LCM)-resistant ...
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Characterization of lsa(D), a Novel Gene Responsible for Resistance to Lincosamides, Streptogramins A, and Pleuromutilins in Fish Pathogenic Lactococcus garvieae Serotype II 査読あり
Shi, Y.-Z., Yoshida, T., Fujiwara, A., Nishiki, I.
Microbial Drug Resistance 2021年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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A novel jumbo Tenacibaculum maritimum lytic phage with head-fiber-like appendages 査読あり
Kawato Y.,Istiqomah I.,Gaafar A.Y.,Hanaoka M.,Ishimaru K.,Yasuike M.,Nishiki I.,Nakamura Y.,Fujiwara A.,Nakai T.
Archives of Virology 2020年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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A novel Asfarvirus-like virus identified as a potential cause of mass mortality of abalone 査読あり
Matsuyama T.,Takano T.,Nishiki I.,Fujiwara A.,Kiryu I.,Inada M.,Sakai T.,Terashima S.,Matsuura Y.,Isowa K.,Nakayasu C.
Scientific Reports 2020年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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Epidemiological Study on Newly Emerging Lactococcus garvieae Serotype II Isolated from Marine Fish Species in Japan 査読あり
Shi, Y.-Z., Nishiki, I., Yanagi, S., Yoshida, T.
Fish Pathology 2019年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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Improvement of the Pacific bluefin tuna (Thunnus orientalis) reference genome and development of male-specific DNA markers 査読あり
Suda A.,Nishiki I.,Iwasaki Y.,Matsuura A.,Akita T.,Suzuki N.,Fujiwara A.
Scientific Reports 2019年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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Targeted mutagenesis of the ryanodine receptor by Platinum TALENs causes slow swimming behaviour in Pacific bluefin tuna (Thunnus orientalis) 査読あり
Higuchi K.,Kazeto Y.,Ozaki Y.,Yamaguchi T.,Shimada Y.,Ina Y.,Soma S.,Sakakura Y.,Goto R.,Matsubara T.,Nishiki I.,Iwasaki Y.
Scientific Reports 2019年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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Comparative genomic analysis of three lytic Lactococcus garvieae phages, novel phages with genome architecture linking the 936 phage species of Lactococcus lactis 査読あり
Hoai, T.D., Nishiki, I., Fujiwara, A., Yoshida, T., Nakai, T.
Marine Genomics 2019年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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Complete genome sequence and characterization of virulence genes in Lancefield group C Streptococcus dysgalactiae isolated from farmed amberjack (Seriola dumerili) 査読あり
Nishiki, I., Yoshida, T., Fujiwara, A.
Microbiology and Immunology 2019年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）
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Genetic parameters and quantitative trait loci analysis associated with body size and timing at metamorphosis into glass eels in captive-bred Japanese eels (Anguilla japonica) 査読あり
Nomura K.,Fujiwara A.,Iwasaki Y.,Nishiki I.,Matsuura A.,Ozaki A.,Sudo R.,Tanaka H.
PLoS ONE 2018年
掲載種別：研究論文（学術雑誌）